Стоп контаминации(хитрые фишки при изготовлении споровых взвесей)

[@ToniJah]

Яркого солнца вам, бразики. Краткая предистория. С момента заказа своего первого принта  (сентябрь 2019) я невероятно увлекся грибоводством, превратил свою квартиру в маленькую лабораторию. Скажете- шрумил бы да шрумил себе на трипы. Но ведь охото углубиться, познать, довести до идеала. Но и даже не в этом дело. Первый гров дался мне прям легко и я собрал свои заветные, первые 50гр сухих грибов. Грибы будто показались мне, сказали-на, вкуси. Вкусил?  А теперь пое××сь, теперь мы испытаемиспытает силу твоего намерения. А дальше как по накатанной -любое действие приводило к плесеням и бактериалке.  Таких цветов плесеней я не видовал до этого да еще и водном месте. Это все сподвигло меня на поиски решений, на освоение многих микологических техник работы с культурами.   За первое время видимо успел я еще и добавить концентрацию плесеней в пространство своей квартиры. Не помогало ничего. Я хотел все бросить, но не сдался. В итоге сейчас второй месяц подряд у меня все замечательно зарастает. Во первых я нехило так набил руку, а во вторых хочу поделиться своими наработками. 

1-очисти воздух своей квартиры. Не ленись делать уборку с белизной иногда. И закажи с али экспресс генератор озона. Так и забей в поиске. Я себе взял производительностью 10 грамм /час. Это огромная концентрация,  промышленная, на там есть и мощней.  И это....акуратнее с этой штукой, почитай про нее сначала. Поехали дальше

2.не пренебрегай стерильными техниками. Все кали над огнем, что калиться,  три спиртом, что треться, научись стерилить зерно без варки. Например овес заливается водой ровно по уровень зерна в таре и еще прям чуть чуть. Залил. Оставил на несколько часов. Стерилизовал.  

3- а это моя самая главная наработка. Многие из нас юзают хлорамфениколь и гентамицин. Окей, бактерии сдохли, а плесеня?  (они тоже из царства грибов) Так вот в процессе чтения и поиска я наткнулся на чудесное средство. У него несколько торговых названий, но основное ФУНДАЗОЛ. Действующее вещество БИНАМИЛ. В итоге что мы имеем. Работаешь с агаром-пожалуйста. Добавляй левик и фундазол и вот тебе селективная среда. Замачиваешь зерно? Легко. Добавляй левик и фундазол. При соблюдении рабочей концентрации он убивает плесеня а наш мицелий не трогает. Имеешь в наличии зараженный принт или жм, опять же-разгоняем принт на селективном агаре, в жм добавляем гент+фундазол. Приготовил взвесь-выбери в шприц гент+фундазол. Пошла плесень прям на плодоносящем блоке? Да опшикай ты его фундазолом. Но оговорюсь- штука рабочая, но при частом использовании наш мицелий становится слабже тоже, к примеру не стоит делать с ним к ряду 3 регидрации подряд. Ну и не всегда он все же спасает от плесени-Производитель указывает что у плесеней к нему в итоге развивается резистенция. При каких условиях это происходит я не знаю. И дальше я второй частью текста даю текст взятый со шрумери. В нем указывается рабочая концентрация фундазола, и она примерима к любой технике работы, к любому этапу. И насчет вредности его на организм - честно скажу, мне поую.  Сейчас все вредно, я вырашиваю и ем грибы , и вопрос чего-то там для физического тела меня мало интересует.  Занимайся спортом и твое тело переварит любую бяку.

[@ToniJah]

Сначала хотел бы поздороваться с участниками этого форума! Это мое первое сообщение тут. Раньше я обитал на entheogen.ru и некоторых других форумах под ником ibmf2000. Особенной активностью не выделялся, т.к. я еще до сих пор не гровер, но нравится выращивать и изолировать мицелий грибов, а форумы, подобно вашему, дали технологию. За это снимаю шляпу, ведь нигде нет(в научной лит-ре) способов выращивания мицелия в домашних условиях. Могу похвастать пока что выделением мицелия след. видов: armillaria mellea(опенок осенний - миц. в темноте прикольно светится); polyporus squamosus(трутовик чешуйчатый); pleurotus eryngii(вешенка королевская - купил в магазе и клонировал, миц. очень красивый); pleurotus ostreatus(тоже из магазина). Это мое хобби. Я почти его бросил 1,5 года назад, но теперь решил снова заняться. Возможно скоро стану гровером волшебных грибов Знаю, что это флуд, но прошу не удалять. 
 
Теперь к делу. Вот мое сообщение от 29 октября 2010 на форуме энтеогена: 
 
Читал недавно материалы со shroomery.org и наткнулся на тему про селективные фунгициды. Там один чел утверждал, что концентрация беномила 10мг/л тормозит(практически прекращает) рост плесеней(низших грибов) и прорастание их спор, но на споры и мицелий базидиомицетов не влияет. 10мг/л - это его личный опыт, но в подтверждение своих слов он приводит номера страниц и название книг, где утверждается, что среды, содержащие 1-5мг/л беномила+антибиотики являются лучшими для выделения чистой культуры мицелия высших грибов(Mycologia 83(3), 1991, pp. 296-302 and Can. J. Microbiol. 41, 1995, pp. 104-107). Кто-нибудь наверняка вспомнит про пероксид водорода, но он обладает след. минусами: 
1) Нельзя проращивать споры кубов(некоторые проращивают, но в пероксидной книге говориться, что такой мицелий может быть с генетическими дефектами); 
2) Нельзя автоклавировать(беномил и его производные можно); 
3) Он не эффективен против скопления спор плесневых грибов и сформировавшихся колоний плесени; 
 
Эти минусы у беномила отсутствуют. К сожалению, фунгициды, содержащие это вещество сняты с регистрации на территории РФ, большинства стран Европы и США. Эта статья разъяснит почему http://www.websad.ru/archdis.php?code=225574. Наиболее известный фунгицид, содержащий беномил, это наверное Фундазол. Его еще можно достать в МО(по крайней мере, на форумах так пишут), а так же в Белоруссии и на Украине. На шрумери также предполагают, что карбендазим(тоже фунгицид) может обладать такими же свойствами, как и беномил т.к. является его производным. Честно говоря, беномил - нестабильное соединение, плохо растворимое в воде. Он в почве и в растениях(значит и в воде) через 19 часов после обработки растений почти полностью переходит в карбендазим(это соединение хорошо растворимо в воде). На счет "ядовитости" беномила хорошо написано в статье "Чепракова Андрея Владимировича -кандидата хим. наук, доцента, преподавателя МГУ им. Ломоносова, члена редколлегии "Журнала Органическая химия" и, вообще, очень уважаемого человека в своих кругах", ссылка на которую приведена выше. Он безопаснее других фунгицидов. 
 
Почему я это пишу, раз этот фунгицид запрещен? Потому что его использования открывает слишком широкие возможности(в первую очередь, удачное проращивание спор с зараженных принтов). К тому же его еще можно достать окольными путями... 
 
К стати, вот марки, под которыми скрывается беномил: 
Фундазол; 
Бенлат; 
Беномил 500, СП. ООО "Агрусхим"; 
Беназол СП. ЗАО "Щёлково Агрохим"; 
Бенорад СП. ЗАО "Август". 
 
Марки карбендазима(действие не проверено!): 
Карбендазим(carbendazim); 
Дерозал(DEROSAL); 
Колфуго супер; 
Колфуго супер колор; 
Комфорт; 
 
Наверняка возникнет вопрос, как получить такую концентрацию (10мг/л)? Я придумал такое решение. Фундазол обычно продается как порошок в пакетиках по 10 г. с содержанием беномила 500 г/кг(50% беномила). Известно, что 1 г=1000 мг и 1 л=1000 мл. Если добавим 2 г фундазола в литровую банку с дистиллированной водой и растворим, то получим по 1 мг беномила в каждом миллилитре. Осталось набрать в шприц 10 мл такого раствора и добавить к литру своей среды(если точнее, то к 990 мл). Хотя для начала, думаю, надо использовать концентрации по меньше, т.к. 10 мг/л - это предел, после которого рост мицелия высших грибов тоже может тормозиться. 
 
Порядок приготовления агара: 
1.Готовим среду как обычно. 
2.Добавляем гентамицин и беномил. 
3.Добавляем агар. 
4.Стерилизуем. 
 
Все! Агар, непригодный для роста бактерий и плесеней, готов! 
 
ПРИМЕЧАНИЕ: 
Это не законченная инструкция, а лишь анализ 2 постов pinback'а и workman'а со shroomery.org(Тема о селективных фунгицидах: пост номер #5391176 ; Изоляция от плесеней: пост номер #2891580), а также собственные размышления на эту тему. Лично мной этого не проверено(В Литве даже денатурат и гентамицин без рецепта нельзя достать), поэтому я не несу никакой ответственности, если у вас что-то не получится. А не получиться может прежде всего из-за старого "паленого" Фундазола, качество которого никто не контролирует. Криворукость тоже никто не отменял)). Однако, сомневаться в правдивости слов наших американских "коллег" не приходиться. Американским микологам такой способ выделения чистой культуры базидиомицетов известен уже по меньшей мере 20 лет. А как вы думаете выделяют мицелий высших грибов, например, из кусочка почвы? Вот подтверждение: Отсканенная страница "Микологии" за 91 год(Hymenmycetes - это группа базидиомицетов, куда входят почти все наши съедобные грибы: боровики, сыроежки и т.д.). Там даже говориться, что для выделения armillaria mellea(опенка осеннего) можно использовать концентрацию 15 мг/л, а для остальных базидиомицетов 5 мг/л(все это написано в 4 абзаце). Вот еще один пдф документик, так и называется Isolation of Saprophytic Basidiomycetes from Soil. Там используется концентрация 5 мг/л. Среда с беномилом также упоминается здесь. 
Теперь несколько слов про токсичность. Вот показательная цитата из википедии: 
"Benomyl is of such a low toxicity to mammals that it has been impossible to administer doses large enough to establish an LD50. It has an arbitrary LD50 that is "greater than 10,000 mg/kg/day for rats". Skin irritation may occur through industrial exposure, and florists, mushroom pickers and floriculturists have reported allergic reactions to benomyl. 
 
In a laboratory study, dogs fed benomyl in their diets for three months developed no major toxic effects but did show evidence of altered liver function at the highest dose (150 mg/kg). With longer exposure, more severe liver damage occurred including cirrhosis". 
 
Краткий перевод: Беномил обладает настолько малой токсичность для млекопитающих, что невозможно установить дозу LD50(когда половина особей популяции гибнет). Для крыс это больше, чем 10,000 мг/кг/день. Однако, возможны раздражение кожи и аллергия у людей при частых контактах с беномилом. 
 
Меня еще тогда заинтересовала возможность создание универсального агара для выделения базидиомицетов. Это же вообще сказка! Особенно текут слюнки от Isolation of Saprophytic Basidiomycetes from Soil(выделение сапротрофных базидиомицетов из почвы). Там смысл в том, что промытый кусочек почвы кладется на агар и готово! Через несколько дней есть мицелий. Для гроверов это тоже открывает очень широкие возможности. Ведь можно было бы выделять мицелий из сушеных грибов(вернее из спор там сохранившихся), я уже не говорю о сильном упрощении работы с агаром.Взято со шрумери во благо всех познающих

[djafarchik]

Полезенько  Давно как то видал вроде и даже ее на ентеогене почившем , но слава Грибу и тебе ты инфо к нам принес в клуб 

[@ToniJah]

http:// Мы и есть-грибы)))

[imikal]

спасибо за инфу

[imikal]

Увидел интересную реакцию: ЖМ тампенсисов, в воде плавало медуз 10 маленьких и так было месяца полтора с очень медленным ростом. В какой то момент решил добавить фундазол тк черные точки в медузах давали опасность. В раствор было введено половина максимальной концентрации.

Спустя 4 дня  началось бурное развитие. Ощущение что там произошёл взрыв тк остались маленькие медузки и огромное количество червячком из мицелия.

Если кто то может объяснить реакцию - подскажите для большей объективности.

 

[imikal]

Кроме того испытан беномин на зеленой плесени. Итог: Беномин проиграл бой зеленке

Будут встречаться другие случаи - буду дополнять информацию

[@ToniJah]

В 28.09.2020 в 03:57, imikal сказал:

Кроме того испытан беномин на зеленой плесени. Итог: Беномин проиграл бой зеленке

Будут встречаться другие случаи - буду дополнять информацию

Надо понимать разумные пределы работы беномила.  И у плесени к нему развивается резист. очень быстро

[imikal]

В 19.10.2020 в 06:16, @ToniJah сказал:

Надо понимать разумные пределы работы беномила.  И у плесени к нему развивается резист. очень быстро

здесь скорей всего это и получилось потому что он изначально был добавлен при варке стерилизации сена. будут встречаться другие случаи - буду писать здесь