Лидеры

К настоящему времени методы, используемые гибридизаторами лилейников для преобразования диплоидной гермаплазмы с помощью митотических ингибиторов - колхицин , оризалин, трифлуралин, амипрофос-метил, кофеин, парадихлорбензол, бета-оксихинолин и др. , включают: технику воздействия на прорастающие семена, полиплоидизация методом культуры ткани, преобразование открытой меристемной области, инъекционный метод. Из химических агентов, вызывающих нарушение правильного расхождения хромосом, наиболее эффективен алкалоид колхицин. Он относится к так называемым- митозным ядам . Митозные яды разрушают микротрубочки веретена деления, что делает невозможным нормальное расхождение хромосом в митозе или мейозе. Практически, все работы по преобразованию диплоидных лилейников в тетраплоидные, имеющие научное обоснование, проходили с использованием колхицина. Все остальные мутагены для увеличения плоидности лилейников использовались гибридизаторами любителями в частных исследовательских экспериментах В том числе есть эксперименты, которые ведутся с 2003 года по использованию мутагенного воздействия на семена лилейника и хосты инфракрасным излучением (S.Zolock 2003). В Университете штата Канзас проводились опыты воздействия радиоактивными изотопами в виде инъекции в цветонос лилейника. Изучался процесс работы впрыска и его результативность. Гибридизаторы - аматоры активно ведут эксперименты по применению кофеина, для обработки семян в целях полиплоидизации лилейников. Применение гербицидов, таких как - оризалин (Oryzalin) и трифлуралин (Treflan) в малых дозах концентрации можно использовать для удвоения хромосом лилейников, как для обработки самого растения, так и его семян. Оризалин влияет на деление клеток так же, как и колхицин, но более эффективно и с меньшей токсичностью по отношению к пользователю. Оризалин доступен в продаже, как гербицид сурфлан Surflan – AS ( 40% oryzalin). Оризалин труднорастворим в воде. Предварительно растворяют 0,5 мл, 40% oryzalin в 100 мл теплого изопропилового спирта или водки, добавляют 2 столовые ложки 99% ДМСО (диметилсульфоксид). Постепенно добавить теплой воды 3 литра 900 мл. Получаем раствор приблизительно 0, 005 % оризалин, готовый к обработке растений. Раствор для преобразования инъекционным методом с использованием Surflan( оризалин ), который предлагает Джеймс Госсард : 1. Чистый оризалин – 99,9% , также известный , как 3,5-динитро-N4N4-дипропил-сульфанимид. Готовим исходный раствор : растворить 0, 3463 грамма оризалина в 1-2 мл ДМСО ( диметилсульфоксид ) и разбавить дистиллированной водой до 100мл. Готовим рабочий раствор : развести 1 мл исходного раствора в 100 мл дистиллированной или деионизированной воды ( по желанию добавить 1-2 мл ДМСО ) 2. Surflan AS (оризалин 40,4 % ) Готовим исходный раствор: Растворить 0,857 грамма ( около 1 мл ) сурфлана в дистиллированной или деионизированной воде и разбавить до 100 мл . Готовим рабочий раствор : Развести 1 мл исходного раствора в дистиллированной воде . Добавить 1-2 мл ДМСО . Существует очень широкий диапазон концентраций сурфлана, которые используются цветоводами для полиплоидизации. Тони Авент (Северная Каролина) использует 1% - 0,5 % раствор для хост, Кевин Вон ( USDA) - 0,003 % для лилейников, Артур Эванс ( Арканзас) использует 0, 005 % раствор оризалина для восточных и азиатских лилий. Теперь поговорим о мутагенном воздействии колхицина на лилейник. Когда , мы говорим о мутациях, вызванных действием колхицина, мы должны понимать это определение в широком смысле значения. Колхицин не вызывает мутации гена, как например рентгеновские лучи, а только изменяет, удваивает хромосомное число клетки. Концентрации рабочего раствора колхицина, используемого для стимулирования полиплоидизации, обычно имеют 0, 01 % , 0,02 % , 0, 25 % , 0,5 % , 1 %. Применение которых, будет зависеть от вида ткани и способа обработки. Обычно начинают с применения больших доз колхицина, но они могут полностью убить семена и сеянцы, поэтому начинать эксперименты с колхицином надо на менее ценных сортах или иметь дубликат экспериментального лилейника. Длительность обработки является важным показателем и определяется для каждого типа материала индивидуально. Длительность обработки зависит от времени, необходимого для цикла деления хромосом в ядре конкретной ткани. Для обработки применяют как водный раствор колхицина разной концентрации, так и раствор колхицина в касторовом масле, глицерине, агар-агаре. Приготовление исходного раствора колхицина : Налить 10 мл дистиллированной воды в мерный цилиндр . Взвешиваем на мерных весах 100 мг ( 0,1 г ) колхицина. Аккуратно ссыпаем порошок колхицина в бутылочку добавляем воду, плотно закрываем и встряхиваем. Порошок колхицина хорошо растворяется в воде . Мы получили 1% раствор колхицина. Для получения растворов различных концентраций: 0,5 % раствор : 50 мг ( 0, 05 г ) колхицин , 10 мл воды 0,5 % раствор : 500 мг ( 0,5 г ) колхицин , 100 мл воды 0,5 % раствор: 5 мл 1% раствора , 5 мл воды 0,25 % раствор: 25 мг ( 0,025 г ) колхицин , 10 мл воды 0,25 % раствор: 250 мг ( 0, 25 г ) колхицин , 100 мл воды 0,25 % раствор: 5 мл 0,5 % раствора , 5 мл воды 0,25 % раствор: 5мл 1 % раствора , 15 мл воды Для повышения эффективности проникновения раствора колхицина в растительные ткани, можно добавить 2-5 капель чистого ДМСО , и 1/10 капли ПАВ ( поверхностно-активного вещества ) Еще один рецепт приготовления раствора колхицина , дает S. A. Zolock ( 2003 ) 1 грамм колхицина разводится в 470 мл 0,1 % раствора кинетина и добавляется 30 мл 5 % ДМСО . Кинетин - гормон роста добавляется для стимуляции клеточного деления . G. Doorakian ( 2006 ) также, использует кинетин для приготовления раствора колхицина . Исходный раствор : 500мг ( 95 % ) порошка колхицина добавляется в раствор кинетина (10 мл дистиллированной воды и 1 мг кинетина). Этот раствор может храниться в холодильнике до 6 месяцев. Рабочий раствор : взять 10 мл исходного раствора и добавить 10 капель ДМСО ( 99,7 % ) Раствор применяется для колхицинирования открытой вегетативной меристемы. 4 капли раствора капаются за один прием обработки, на открытый срез корневой шейки лилейника. Наилучшим временем для экспериментов по преобразованию лилейников считается весна - период активного роста, а также во время второй волны активного роста, через две недели после цветения. Гибридизаторы до сих пор находятся в поиске, наиболее результативной методики по преобразованию диплоидных лилейников в тетраплоидные. Результаты полученные в этих исследованиях показывают, что методы, которые используют гибридизаторы лилейников в настоящее время, для преобразования диплоидной зародышевой плазмы в тетраплоидный уровень, приводят к получению преимущественно миксоплоидов. Это означает, что полученные преобразованные лилейники фактически являются химерными растениями, состоящими из диплоидных, тетраплоидных (увеличение числа хромосом в два раза) и октоплоидных (в четыре раза) тканей. Это явление может частично отразиться на более высоком уровне стерильности в потомстве гибридов, при использовании новообращенных клонов. МЕТОДЫ КОЛХИЦИНИРОВАНИЯ ЛИЛЕЙНИКОВ “Гибридизатор должен использовать достижения науки преобразования, но мастерство гибридизации – это элемент, который не поддается количественному определению .” Bill Waldrop ВНИМАНИЕ! Колхицин является высокотоксичным ядом ! Хотя сурфлан и трифлуралин является более безопасными, чем колхицин, но они также относятся к высокотоксичным ядам ! Обязательно при работе с ядами пользоваться правилами техники безопасности: использование перчаток, защитных очков, не использовать для экспериментов кухонную утварь. Не пить, не есть, не курить во время экспериментов! Если вдруг после работы с ядами вы ощутили привкус чеснока во рту, характерный для ДМСО. У вас проблемы ! Диметилсульфоксид способствует быстрому проникновению химического раствора в человеческие и растительные ткани. ЗАДУМАЙТЕСЬ ! Насколько вы были не осторожны в работе с ядами. Последствия могут быть печальными ! Хранить колхицин при t + 25 С вдали от источников тепла, влаги и света. Кратковременное хранение при температуре 15 С и 30 С не допускается. Беречь от детей и животных ! Для нейтрализации и обработки места проведения опытов можно применять раствор хлорки 10 : 01, который окисляет колхицин в относительно безвредные соединения. Инструменты и материалы 1. Лабораторные очки. 2. Медицинские перчатки. 3. Аналитические весы. 4. Мерный цилиндр ( с точной мерой эквивалентной 10 мл ). 5. Микро-шпатель или мерная ложечка. 6. Дистиллированная вода. 7. Пипетки. 8. Бутылочка из темного стекла с герметической крышкой. 9. ДМСО ( 99,9% ) 10. Респираторы одноразовые. 11. Скальпель или нож для резки. 12. Шприцы медицинские ,большие и маленькие, для инъекций инсулина. 13. Микроскоп. 14. Журнал для ведения записей. Процедура обработки семян водным раствором колхицина 1. Проращиваем семена традиционным способом во влажной салфетке до появления белых корешков. 2. Процесс обработки химическими мутагенами начинать на 5-8 день, когда все семена покажут прорастание. 3. Проросшие семена положить в стеклянный контейнер, залить семена рабочим раствором колхицина или оризалина и обрабатывать 24 часа в темноте * . Не использовать пластиковую посуду и не покрывать семена марлей или салфеткой, во избежание поглощения активного вещества. Концентрация раствора может выглядеть очень слабой, не поддавайтесь искушению повысить концентрацию раствора. Температура воздуха при обработке должна быть 26С - 29С. Препарат влияет на клетки, которые активно делятся, поэтому температурный режим очень важен для успешной полиплоидизации. Температура должна быть достаточно велика, чтобы стимулировать быстрое деление клеток. 4. После 24-часовой обработки, основания растущих побегов должны быть опухшими, это работает, как идентификация того, что обработка была эффективной. 5. Завернуть семена в марлю и промывать под медленно текущей проточной водой, в течение 4 часов. 6. Семена садим в плодородную почвенную смесь не слишком глубоко, так как семена после обработки очень склонны к гниению. Можно создать тепличные условия во избежание потери влаги. Полив редкий, почва должна быть слегка влажной. 7. Проращивание сеянцев проходит в хорошо прохладных 22С – 23С, в тускло освещенных условиях, пока не начнется активный рост. После семи дней роста освещенность постепенно можно увеличивать. Смертность сеянцев может достигать до 50 %. 8. У преобразованных сеянцев листья будут жесткие, деформированные и иметь более глубокий зеленый цвет. Появление первых проростков будет иметь вид не острых перышек, а как бы маленьких зеленых комочков. Окончательный итог о преобразовании можно подвести на основании визуального анализа размеров пыльцы и устьиц листа лилейника, по сравнению с необработанными растениями. Эта процедура влияет на все части растения. Единственный недостаток, что корни обработанных растений очень плохо растут. *S. Zolock (2003) предлагает замачивать семена лилейника в 0,25% растворе на 72 часа. Инъекционный метод колхицинирования цветоноса лилейника Первый раз методика колхицинирования с применением шприца проводилась в 1948 году. С каждым годом методика совершенствовалась и к 1955 году эксперименты показали, что инъекционный способ введения колхицина в цветочный стебель, является эффективным для получения тетраплоидной пыльцы и семян. Инъекционный метод состоит из введения раствора в сосудистую систему цветоноса лилейника с помощью устройства из стеклянных трубок, которое крепится на цветоносе. Методику и описание инъекционного прибора дает Buck W.Quinn (Arcadia , California 1969). Рабочий раствор колхицина оптимальной концентрации от 0,05 % и до 0,02 % подается непрерывно по системе трубок в прокол 1 мм, в течение 24 часов. Продолжительность воздействия колхицина можно сокращать или увеличивать по мере необходимости. Сезон и температура окружающего воздуха вовремя обработки имеют важное значение. Цветонос должен быть на ранней стадии роста, когда цветочные почки достигают размера 3-5 мм для цветка диаметром 15 см. Со временем, эта техника усовершенствовалась и все также является важной в разведении тетраплоидных лилейников. Описание технологии инъекционного метода Gary Schaben . Инъекции в цветочный стебель делаются в средней зоне, чуть ниже спящей почки на 3 см. Диаметр прокола может быть 1 мм и чуть больше, для лучшего результата. Игла вводится в полость цветоноса под уклоном вверх, но так, что бы игла все время оставалась наполненной раствором колхицина, можно сказать, что игла должна быть практически вертикальна цветоносу. Очень важна стадия развития цветоноса при которой обработка колхицином будет эффективна. Цветонос должен быть в начальной фазе цветения, когда самый крупный бутон имеет размер приблизительно 2,5 – 3,5 см длинной. На этой стадии колхицин может повлиять на пыльники. Игла из стебля не вынимается, с тем, что бы после инъекции в игле оставалось немного рабочего раствора. Для процесса конверсии используется 0,025% раствор колхицина с добавлением нескольких капель ДМСО и нескольких капель синего пищевого красителя. Цель использования пищевого красителя, это визуализация поступления раствора в растительные ткани лилейника, когда чашелистики окрашиваются в синий цвет. Резервуар иглы заполняется раствором несколько раз в день . Обработка лилейника длится 1-2 суток. За несколько дней перед колхицинированием полив растений прекращается. Обработанное растение поливается после окончания процедуры, что способствует более быстрому продвижению колхицина в тканях лилейника к цветочным почкам. Инъекционная игла с рабочим раствором прикрывается защитным колпаком, для предотвращения деградации препарата от солнечных лучей. Когда колхицинированный бутон открывается, он часто имеет деформированный вид, так как представляет собой сочетание диплоидных и тетраплоидных тканей. Необходимо проверить пыльники под микроскопом, что бы убедиться в успешности конверсии. Эту методику для преобразования цветочных почек активно использовал Боб Карр (Флорида). Он также добавлял в рабочий раствор синий краситель, для визуальной индикации поглощения колхицина. За три недели до цветения обработка прекращалась. Сине-зеленый цвет пестика показывал, что колхицин достиг своей цели. Потенциально-преобразованная пыльца проверялась под микроскопом. Технология инъекционного метода Stephen Zolock Время проведения обработки, когда бутоны лилейника на цветоносе достигают размера горошин. Поршень удаляется из инсулинового шприца. Игла шприца вводится в полость цветоноса под углом 45 градусов вниз, не прокалывая насквозь ствол цветоноса. 0,25% раствор колхицина разбавляется дистиллированной водой в два раза. Вторым шприцем набирается рабочий раствор и вводится в шприц закрепленный на цветоносе. Раствор колхицина постоянно добавляется в шприц, по мере его поглощения тканями лилейника. Необходимо накрыть шприц колпаком из фольги, для предотвращения попадания солнечного света. Обработку проводить 48 часов, после чего удалить иглу из цветоноса. Таким методом можно колхицинировать листовой узел на цветоносе лилейника, стимулируя одновременно БАП 10 (3,5 мл /100 мл воды) разрастание пролиферации (воздушного отводка), который в конечном счете преобразуется в тетраплоидный. Преимущества инъекционного метода в том, что вы не рискуете потерять весь диплоидный, экспериментальный саженец. В худшем случае вы потеряете цветонос, но всегда есть возможность для преобразования других цветоносов или повторение попытки в следующем году. Надо не забывать , что применение инъекционного метода, не дает нам получение химеры, и не вызывает полиплоидию всего растения, экспериментальный лилейник так и остается диплоидным. Но, этот метод дает нам получение тетраплоидной пыльцы, и возможность запуска новых генетических характеристик в гибридизационную линию. В этом и есть весь смысл этого мероприятия. Методы колхицинирования открытой вегетативной меристемы Современная версия инъекционного метода колхицинирования открытой вегетативной меристемы, включает в себя: обрезка стебля лилейника на 5 см выше уровня корневой шейки или на 1,5 см над уровнем земли, раствор колхицина шприцем вводится в срез. Более щадящий метод, по сравнению с резкой корневой шейки лилейника. Этот метод можно применять на для преобразования диплоидных спайдеров, у которых стебель в диаметре меньший, в результате чего возникают трудности с резкой корневой шейки. Методы J. Brennan and B.King ( 2003 ) Стебель лилейника вырезается на 1 см выше корневой шейки. Инъекции делаются два дня подряд по 1 мл - 0,2 % раствором колхицина. По второй методике, делается срез чуть выше уровня корневой шейки и открытая меристемная зона покрывается ватным тампоном, пропитанным 0,4 % раствором колхицина. Обработка ведется от 24 до 48 часов. В 2004 году Hamidou, Sakhanokho проводился эксперимент по этим методикам с увеличением дозы и концентрации колхицина. Инъекции проводились по 3мл – 0,4 % раствором колхицина. В результате преобразования были получены, преимущественно миксоплоиды. Исследования проводились для оценки методов полиплоидизации лилейников и нахождения легкой конверсионной техники, которая будет эффективно производить тетраплоиды. D.Trimmer использует 0,25 % раствор колхицина 5 раз в течение трех дней. Раствор капается по пару капель на открытый меристемный срез лилейника. Методика колхицинирования Bill Waldrop Саженец лилейника подготавливается к обработке раствором колхицина. Он пересаживается в контейнер с плодородным грунтом, в котором будет находиться ближайшие 6-8 недель. Саженец садится так, что бы корневая шейка находилась немного выше уровня почвы. Это позволит комфортнее производить резку стебля лилейника для обработки колхицином. В зависимости от механического состава почвы, как минимум за 15 дней прекращается полив экспериментального растения. Именно на этот подготовительный момент Билл обращает особое внимание. Экспериментальный лилейник должен быть максимально подсушен пред обработкой колхицином. Стебель лилейника срезается на 2 см выше уровня корневой шейки. Срезу придается овальная форма, высота доводится, приблизительно до 1 см, что бы центральная часть с молодым ростком (меленькая зеленая точка в центре корневой шейки) находилась на приоритетном уровне. Резка стебля лилейника, как говорит Билл, является наибольшим искусством в науке преобразования. Если стебель срезать высоко, процесс обработки будет не эффективным, так как колхицин не может проникать глубоко в ткани растения. Если сделать срез слишком близко к корневой шейке, лилейники погибнет. Рабочий раствор приготавливается так: 400 мл дистиллированной воды смешивается с 1 г колхицина, добавляется 1 мл - 10 капель ДМСО. График обработки: классический пример, обработка проводится 3 раза в день в течение трех дней подряд. Есть мнение, что, чем ближе к корневой шейке сделан срез, то понадобится меньшее количество процедур обработки колхицином. Другие гибридизаторы предлагают обрабатывать лилейник один раз в течение трех дней. Или в первый день растение обрабатывается колхицином один раз и в следующие два дня, по два раза на день. Некоторые лилейники очень трудно поддаются процессу преобразования. Колхицин не принимается лилейником, т.е визуально вы наблюдаете, что капли раствора не поглощаются растительной тканью. Тогда срез корневой шейки лилейника обновляется и обработка повторяется. Колхицинирование таких растений проводится на протяжении пяти дней подряд, по два раза в день. Первые несколько недель после обработки являются критическими в процессе колхицинирования. Надо приложить все усилия по сохранению лилейника в этот период. Первый полив проводить не раньше 10-15 дней после обработки растения колхицином. Затем каждые 5-6- дней вода подается в малом количестве по бороздке края горшка. Не допускать попадание влаги на обработанную корневую шейку. Колхицинированный лилейник становится очень уязвимым к бактериальному гниению. Его можно сравнить с пациентом после химиотерапии, когда организм предельно слаб, а иммунитет убит химическим воздействием лекарств. Излишняя влага в результате обильного полива приведет к неминуемой гибели лилейника. Для этого необходимо строго дозировать полив и обрабатывать срез лилейника фунгицидами (фундазол, каллоидная сера). Вести каждодневный контроль за обработанным лилейником. При необходимости проводить обрезку мертвых тканей на срезе стебля, с последующей присыпкой фунгицидом. По собственному опыту Билл отмечает, что если замечено гниение центрального ростка корневой шейки лилейника, тогда спасти растение практически не удается. Если обработка лилейника колхицином прошла относительно успешно, то визуально можно наблюдать, что рост центральной зеленой почки замедляется, происходит так называемое, явление застойного роста. Молодые листочки растущие из центра лилейника имеют вид не длинных перышек, а деформированных, широких листочков. Этот процесс роста листьев колхицинированного лилейника называется - поперечной деформацией. Дальнейшая идентификация плоидности проводится на основании цитологического анализа. Метод получения полиплоидов в культуре in vitro Разработанный метод полиплоидизации лилейника путем колхицинирования в культуре ткани(экстракорпоральная полиплоидизация), позволяет получать полиплоидные линии для использования их в последующей селекционной работе (Chen, Holden 1972; Heuser 1976; Meyer 1976). Устанавливается оптимальный состав питательной среды и концентрация колхицина, для получения микроклонов лилейника с повышенной плоидностью и жизнеспособностью. Разрабатываются параметры состава питательной среды, позволяющие ускоренно размножать исходный материал, свободный от грибных и бактериальных болезней. На основе этого разработан оригинальный метод получения растений с изменённым набором хромосом и новыми морфологическими признаками. Метод культуры ткани требует больших материальных затрат и является не практичным для гибридизаторов лилейников среднего уровня. Методика получения полиплоидных форм включает в себя, введение в культуру in vitro эксплантов, микроразмножение растений, культивирование микроклонов на питательной среде с добавлением раствора колхицина различных концентраций в течение 48 часов, проведение отбора по количеству хромосом, размножение, укоренение и перевод в закрытый грунт полученных полиплоидных лилейников. Метод позволяет получать высокий процент растений с изменённым генотипом, в качестве исходных форм для селекции. Метод колхицинирования in vitro является мощным инструментом для выращивания гермаплазмы декоративных растений (Horn 2002). ХИМЕРЫ И ЦИТОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ В большинстве случаев, в результате конверсии диплоидной зародышевой плазмы лилейника в тетраплоидную, гибридизаторы получают преимущественно миксоплоиды. Это означает, что преобразованные лилейники являются фактически химерными растениями. "Химера" - это растение-мутант, неоднородный генетически организм, в котором существует несколько видов клеток с генетически различным строением. Примером видимой мутации хлоропластов и образования химерного растения является пестролистность или появление секторов ткани другого цвета. Лилейник – химера состоит одновременно из диплоидных, тетраплоидных и октоплоидных тканей . Это говорит о том , что преобразование было не полным. Различные клеточные типы четко разделены в пространстве, образуя отдельные слои при делении апикальных меристем. Апикальная меристема побега - место, где находится большинство клеток, которые производят все тело растения. Клеточные деления происходят в активно растущем побеге очень быстро, и поделившиеся клетки растут в длину и ширину, обеспечивая рост побега в длину. Для лучшего понимания этого явления рассмотрим зону точки роста лилейника, так называемую зону апикальной меристемы. Она имеет три апикальных слоя клеток. Обычный метод описания генотипов областей туники (внешней слоистой области ) и корпуса (внутренней области, где иерархия клеток не очевидна ) - использование сокращений L-I, L-II, и L-III, начиная с внешнего слоя. Каждый слой несет ответственность за производство различных частей растения. Слой L-I ответственный за формирование эпидермиса всех органов и формирует мезофильную ткань листа лилейника вдоль поля листа. Слой L-II ответственный за формирование пыльцы и семян (флоральных органов растения), за всю мезофильную ткань лепестков и чашелистиков, а так же за ткань во внешней части листа, около которой формировалась L-I. Из клеток апикального слоя L-III формируется мезофильная ткань центральной области листа , ствол и корни . Таким образом , что бы иметь полное и всестороннее преобразование лилейника, ткани всех клеток, всех трех слоев должны быть изменены с диплоидных в тетраплоидные. Если в результате обработки колхицином изменения происходят в только некоторых клетках, то в результате получаем растение, ткани которого состоят из смеси клеток различного уровня плоидности, т.е. – химера . Это явления наблюдается наиболее часто в процессе преобразования лилейников, когда получается не чистый полиплоид, а химера (Arisumi 1964) . В зависимости от того, в каком слое апикальной системы лилейника произошла полиплоидизация, получаем один их трех типов химер. Структурная классификация химер включает мериклинальные , периклинальные и секториальные химеры. Мериклинальные химеры - тип периклинальных, где мутировала только часть слоя. Измененный клеточный слой может поддерживаться только на одной стороне меристемы. В результате получается, часть цветочного стебля с одной стороны лилейника тетраплоидная. Мериклинальные химеры часто проявляются в лилейниках пестролистностью. Мериклинальные химеры обычно неустойчивы и со временем возвращаются к чистому диплоидному уровню. Периклинальные химеры возникают при полиплоидизации, если клетка- мутант находилась около апикального купола и так, что образующиеся от нее клетки сформировали полный слой из измененного типа. Периклинальные более устойчивы, расположение на побеге как "рука в перчатке", области туники-корпуса. Периклинальные химеры - наиболее важный тип, так как они относительно устойчивы и могут быть вегетативно размножены. Секториальная химера - когда процесс мутаций затрагивает целый сектор апикальной меристемы, простирающийся через все клеточные слои вглубь. Этот тип химер непостоянен и не представляет никакой ценности для гибридизаторов лилейников. Секторальные химеры иногда проявляются в лепестках и чашелистиках лилейника, изменяющих цвет в результате мутации. Мериклинальные и секторные химеры - по своей природе очень нестабильны и вероятность размножения растений с тем же самым фенотипом от них низка. Многие химерные растения в конце концов вернуться к диплоидному уровню или становятся не пригодными в последующей селекционной работе. Успех преобразования довольно низок, в пределах 10 % , хотя некоторые гибридизаторы успешно получают стабильные тетраплоиды. Наиболее стабильные тетраплоиды получаются , если все три клеточных слоя апикальной меристемы становятся тетраплоидными в результате конверсии . Когда мы обрабатываем растение колхицином, мы не знаем , на каком клеточном уровне произойдет полиплоидизация. Скорее всего полученное растение будет химерой, и первые цветы будут производить смесь диплоидных и тетраплоидных гамет. Такие растения требуют повторной обработки колхицином, которая зачастую приводит к получению стабильных тетраплоидов. При достаточно высоком содержании диплоидных клеток (до 50% и выше) в миксоплоидах появляется опасность их деполиплоидизации, т.е. возвращения растения на исходный диплоидный уровень. Поэтому для сохранения полиплоидной ткани необходима дополнительная работа по расхимериванию, для чего удаляют диплоидные быстрорастущие, стимулируя развитие более медленнорастущих тетраплоидных тканей. Соматическая полиплоидизация может произойти в любом месте растения, но она становится важной для гибридизатора тогда, когда она проходит в апикальной меристеме стебля и поражает клетки, которые в конечном счете формируют пыльцу и яйцеклетки лилейника.