Работа со средами

[djafarchik]

Шикарно)) Это краситель пищевой какой то ?

[Емеайя]

4 часа назад, djafarchik сказал:

Шикарно)) Это краситель пищевой какой то ?

Тот самый который указывал ранее

[Kaladze]

В 12.03.2020 в 12:55, Емеайя сказал:

включая поверхность агара, спиртовой салфеткой

А если пикнуть спиртом из пульверизатора?

[Емеайя]

4 часа назад, Kaladze сказал:

А если...?

Я не буду мешать

[Емеайя]

[djafarchik]

ооо! результат, наслышан - Тампаненсисам быть!

[Емеайя]

1 час назад, djafarchik сказал:

ооо! результат, наслышан - Тампаненсисам быть!

Уже пастеризую

Думаю про двухлитровку лучше забыть на пол года

[Емеайя]

Интересные интересности. Не знаю почему, но мицелий ест краситель. Будто высасывает его из агара. Видно слабо. Колонизированнае площадь стала бесцветной

Как понимаю работать с подкрашенным агаром нужно быстро и актуален краситель только на ранних этапах развития, в работе с дикарионами. В дальнейшем мицелий его просто поглощает.

[djafarchik]

В 24.06.2020 в 18:26, Емеайя сказал:

В дальнейшем мицелий его просто поглощает.

ПРожорливый однако Тамп ))

[Емеайя]

12 часов назад, djafarchik сказал:

ПРожорливый

Так лучше видно

Изменено 25 июня, 2020 пользователем Емеайя

[Емеайя]

Интересно в чём дело. Возможно в красителе. Все ли штаммы так себя ведут? 

Изменено 25 июня, 2020 пользователем Емеайя

[djafarchik]

В 25.06.2020 в 08:58, Емеайя сказал:

се ли штаммы так себя ведут? 

пробовать надо , кубы жрали краску точно ,) я как то вместо вермика наверх зерна положил салфетку там рисунок цветной был - когда банку разкейсивал- достал салфетку она вся в мицелии была как  трухлявая стала и рисунка не было на ней )) так еле заметные следы

[Емеайя]

2 часа назад, djafarchik сказал:

пробовать надо

Я думаю все жрут. Меня впечатляет даже не это. А то что они полностью высасывают из агара краску(слой то нормальный). Миц же вродь только сверху ползёт. А вот нет. Глубоко проникает в агар. Это объясняет почему он выжил после того как я сжёг его в петри. Пол часа выжигал сидел в главе... Матов было много когда он на следующий день пошел в рост сразу везде. Нда...

[djafarchik]

мда уж,живучий 

[Емеайя]

ПАЧИМУ НИ СКАЛЬПИЛЬ?!

Пришло время затронуть вопрос инструментов. Слегка. Только самое главное. 

В каких-то там гайдах вы можете найти что-то вроде "нада пакупать скальпиль". Почему же у меня его нет и не будет? Отвечу вопросом. А н̶а̶х̶у̶я̶ зачем он нужен? Агар резать? Представьте что вы собрались резать густое желе или, как многие любят, мягкий мармелад. На сколько скальпель как инструмент будет выигрышным и в чём? Есть ответы? Он типо тонкий? И всё? Вы с мультикультурами работаете, локационно дикарионы изолируете, в чём преимущество скальпеля? Ну? Ради чего вы потратили бабки?..

Выковал я такую вот штуку. Заточил немного - мне не людей резать. 

Это сугубо личный инструмент. Нужной мне формы. Для вас он может быть не удобен. Думаю в дальнейшем сделаю ещё инструментов. Активно пользуюсь тонкими пинцетами. Как прямыми так и сапожками. 

Используемый вами инструмент это ваше, личное, дело. Приобретайте и изготавливаете инструмент который нужен именно вам. Поработайте тем что есть и поймите что именно вам необходимо. И не надо кэш сливать на ветер

Изменено 26 июня, 2020 пользователем Емеайя

[Migele]

В 26.06.2020 в 12:19, Емеайя сказал:

Пришло время затронуть вопрос инструментов. Слегка. Только самое главное. 

Выковал я такую вот штуку. Заточил немного - мне не людей резать. 

Это сугубо личный инструмент. Нужной мне формы. Для вас он может быть не удобен. Думаю в дальнейшем сделаю ещё инструментов. Активно пользуюсь тонкими пинцетами. Как прямыми так и сапожками. 

Используемый вами инструмент это ваше, личное, дело. Приобретайте и изготавливаете инструмент который нужен именно вам. Поработайте тем что есть и поймите что именно вам необходимо. И не надо кэш сливать на ветер

а я вот такую стоматологическую штуку прикупил, оч удобно! 200р всего

[djafarchik]

В 26.06.2020 в 12:19, Емеайя сказал:

Используемый вами инструмент это ваше, личное, дело. Приобретайте и изготавливаете инструмент который нужен именно вам. Поработайте тем что есть и поймите что именно вам необходимо. И не надо кэш сливать на ветер

это да,у самого скальпель с поломанного ножа старого содеповского нержавейка, и петля иннакуляционная самоделка и похожий как у тебя крючек ) Душевные вещи лет по 8 им уже у меня работают 

[muaddib]

В 15.06.2020 в 15:22, Емеайя сказал:

Наконец-то я сделал цветной агар!

Одной капли достаточно на 100 мл раствора

Ты используешь стеклянные чашки петри, или пластиковые одноразовые? Не увидел этого в репорте.

[Емеайя]

2 часа назад, muaddib сказал:

Ты используешь стеклянные чашки петри, или пластиковые одноразовые? Не увидел этого в репорте.

Пластик юзать не разумно. Во первых пастеризация. Как? Ок, я знаю как, но к чему всё это если можно просто в кастрюлю отправить... Гон. Во вторых это мусор. Второй раз заюзать не выйдет, а если и реально то смысл опять мастурбировать сидеть... В третьих деньги. Да, возможно они дешманские, но не проще ли купить то что будешь юзать годами? Не кучу, а одну. Вопрос риторический... 

[Емеайя]

Далее обсудим культуру скошенного агара и понятие выборки

Перед скашиванием нужно всё это добро пастеризовать

Изменено 6 сентября, 2020 пользователем Емеайя

[djafarchik]

25 минут назад, Емеайя сказал:

Перед скашиванием нужно всё это добро пастеризовать

Ждем продолжения и описания этого процесса

[Емеайя]

Начнём с малого. С копипасты

У меня ватномарлевые пробки потому что грибы это аэробные организмы. Не сомневайтесь, на колонизацию кислорода им хватит. Но для длительного хранения этого не достаточно (вопрос сохранности агара затрону позже - тема для меня до сих пор актуальна и есть некоторые моменты требующие подтверждения мы работаем над этим)

 

Посе́в — один из стационарных методов культивирования микроорганизмов на питательных средах, применяемый для культуральной диагностики в медицинской микробиологии, а также для исследования биохимических и биологических свойств в различных биотехнологических целях. В зависимости от содержания исследуемых бактерий(и не только) в образце, проводят посев на плотные питательные среды(в данном случае агар) для получения изолированных колоний и определения чистоты культуры. Если в исследуемом материале содержание микроорганизмов незначительное, то посев проводят на жидкие среды обогащения. Различают различные методы посева.

Заострять внимание на всём не будем. Просто имейте ввиду что мы обозреваем лишь малую часть в рамках нашей сферы. Деятельность не ограничивается с̶р̶а̶н̶ы̶м̶и̶ гайдами или чьим-то методиками. Вашу деятельность определяем ваше мышление и ваши возможности. Не важно что никто "так" не делает. Важен результат который вы получаете и затраченные ресурсы(временные и материальные). К примеру меня дико выносят всяческие среды для жидких и твёрдых культур о которых пишут люди. Многокомпонентные составы... Солод надо добавить... У меня всего один вопрос - что всё это даёт? В чём профит? Харвест на неделю раньше или в грибах химия изменится? Серьёзно, мне не понятно н̶а̶х̶у̶я̶ в чём смысл всего этого дроча? Штамму абсолютно плевать на чём развиваться - есть рамки. Нельзя просто взять и увеличить скорость колонизации хотяб потому что у каждого отдельного штамма в колонии она своя в своих, субъективно идеальных, условиях(моему дикариону кубов оч нравится 32°) - вы и сами, скорее всего, слышали как у кого-то колонизация заняла неделю, хотя всё делалось как обычно. Есть другая сторона медали - какая-то добавка к среде может серьёзно повлиять на вероятность контаминации(я уже писал про картофельный агар - можно, но сложно). Разумеется я не о антибиотиках - не расстраивайте Леонида Аркадьевича

Поэтому главное чтобы среда была хороша для вас - смиритесь, штамму плевать. 

 

Техника посева

Для посевов применяют микробиологические петли, реже — иглы и шпатели. Чаще всего для культивирования используются пробирка и чашка Петри. Универсальным инструментом для засева культуры является бактериальная петля. Помимо неё, для посева уколом применяют специальную бактериальную иглу, а для посевов на чашках Петри — металлические или стеклянные шпатели. Для посевов жидких материалов наряду с петлёй используются градуированная и пастеровская пипетки.

Я уже писал про инструменты. Ради понта можете заказать себе дорогущую петлю, а можете изготовить инструментарий самостоятельно оттолкнувшись от личных нужд и привычек. Представим что у вас две левые руки - это означает что обычный набор "инструментов" вам не будет удобен. Конечно вы можете работать как все, но вам будет гораздо удобнее если в каждой руке будет инструмент под левую руку. Если у вас, как говорят некоторые, руки кривые, то не беритесь за инструмент для пряморуких. Вам нужен инструмент для криворуких и, кто знает, возможно пряморуким будет очень не просто достичь ваших успехов. Отталкиваетесь от своих возможностей и от своих потребностей. Не нужно пытаться быть как все. 

 

Посев на плотные питательные среды (в пробирке) 
При посеве берут пробирку в левую руку, а правой, плотно обхватив пробку четвёртым и пятым пальцами, вынимают её. Удерживая другими пальцами той же руки петлю, сначала в горизонтальном, а потом в вертикальном положении её вносят в открытое пламя и прожигают до красного каления. Остывшей петлёй набирают посевной материал, после чего закрывают пробирку пробкой, предварительно проведя край пробирки над пламенем спиртовки. Пробку при этом обжигать не следует. Затем в пробирку со скошенным агаром вносят петлю с посевным материалом, опуская её до конденсата в нижней части среды, и зигзагообразным движением распределяют материал по скошенной поверхности агара. Вынув петлю, обжигают край пробирки и закрывают её пробкой. Петлю фламбируют в пламени горелки и ставят в штатив рукояткой вниз. Пробирки с посевами подписывают заранее, указывая дату посева, номер исследования и название культуры.

Всё это читается и воспринимается далеко не одинаково - наглядности нет. Можете поискать в сети ролики на которых демонстрируют работу с культурами на твёрдых средах. Они там есть. Разумеется это вещи которые желательно знать. Но может у вас методы будут свои. Ваша голова должна быть с вами

Желательно всегда.

 

 

 

Посев на плотные питательные среды (в чашке Петри) 

Посевы «газоном» производят на плотную питательную среду в чашке Петри. Для этого, приоткрыв левой рукой крышку, петлёй или пипеткой наносят посевной материал на поверхность питательного агара по методу Дригальского. После инкубации посева появляется равномерный сплошной рост бактерий с разделением их на колонии. Идентификацию выделенных бактериальных культур проводят путём изучения морфологии бактерий, их культуральных, биохимических и других признаков, присущих каждому виду.

Отделяю этот момент потому что к вопросу он относится косвенно. Про свой метод засева петри и причинах я писал выше. Это уже относится к колонии. Колонизировать пробирку я смысла не вижу. Если вы не собираетесь работать с монокультурами то пробирки вам не нужны. Если надо, прост загуглите техники посевов.  И разберитесь уже в отличиях между моно и мультикультурой. Разница значительная.

Колония — это видимое изолированное скопление представителей одного вида микроорганизмов, образующееся при размножении одной колониеобразующей единицы (КОЕ) на плотной питательной среде (на поверхности или в глубине её). Колонии бактерий разных видов отличаются друг от друга по своей морфологии, цвету и другим культуральным признакам.

 

Пойду займусь пастеризацией и скашиванием. Для начала необходимо объяснить почему я закашиваю пробирки именно так...

 

 

Недостаток ватномарлевых пробок в том что они люто впитывают воду. Я делаю это так. Вы можете иначе - разрешаю.

Пастеризовать буду час+. Больше не вижу смысла. 

Изменено 6 сентября, 2020 пользователем Емеайя

[Емеайя]

ИТАААААК!!! СКОС!

Здесь я бы хотел обратить ваше внимание на его длинну

Возникает резонный вопрос

Пчимутакнах?!

Ведь пошарив в Гугле вы можете найти вот таких вот коротышей

Дело в том что на таком скосе мне не нужно лезть инструментом вглубь пробирки(было кое-кто мне писал как у него руки трясутся и петля стучит о стенки). Порой я использую пинцет, иногда мне необходимо отрезать кусочек агара - сами попробуйте его со дна выколупывать и сразу всё поймёте. 

 

Почему так обычно не делают? 

Потому что если агар попадёт на ватномарлевую пробку то в̶с̶ё̶ ̶п̶и̶з̶д̶е̶ц̶ риск контаминации увеличивается многократно. 

Подобный скос не очень подходит для хранения штамма(чем больше площадь поглощения тем быстрее его скушаютъ), но отлично подходит для работы с ним. Так же на нём можно наблюдать за развитием организма, что так важно в выборке. Результаты вы видели. Производя выборку из нескольких десятков изолянтов вы можете отбраковывать неугодные штаммы и выбирать лучшее

Очень кропотливая работа требующая знаний, понимания, навыков и находчивости(одним словом времени). Присоединяйтесь. Тут непаханое поле... 

Изменено 6 сентября, 2020 пользователем Емеайя

[Емеайя]

В итоге имеем

До края пробирки +/- 1,5 см. Кладём образец на среду, наблюдаем за развитием

Ло ги ка 

Далее будет биопсия склер. Они на скос и отправятся. Мне нужен нормальный дикарион. 

Изменено 7 сентября, 2020 пользователем Емеайя

[Емеайя]

И вот что получилось

Я взял склеры

Почистил и нарезал. Вот так

Ну и, собсно, положил их в основание скоса. 

Результат мне не нравится. Склеры подкисли, тут одно, там другое... Но это не важно. Главное чтобы вы поняли что я делаю. Сам принцип. Это выборка. Где-то появится контаминация(а может везде), что-то вообще откажется стартовать... Какая разница?.. Принцип наглядно продемонстрирован, а получится или нет уже не так важно(у меня достаточно инокулята для обхода всей этой дрочи). И я поигрался и вы заключение сделали. 

Если повезёт получу дикарион

Изменено 14 сентября, 2020 пользователем Емеайя