nemeth

отошёл от дел... Вавилон если по короче)))

йо. здрасте. я снова с Вами господа

:idea: знаменитые "Быки". - Это была серия китайских картинок, типа комиксов: вначале юноша отправляется в горы, с посошком и котомкой, как американский нэт-уилсовский бродяга образца 1905 года; на следующих изображениях он встречает быка, пытается приручить его, оседлать, наконец приручает и ездит на нем верхом, но потом бросает быка и просто сидит, медитируя под луной, потом спускается с горы просветления, и вдруг на следующей картинке не нарисовано абсолютно ничего, а дальше - цветущие ветви, и на последней картинке юноша, уже не юноша, а толстый старый смеющийся волшебник с большим мешком за спиной, просветленный, входит в город, чтобы напиться там с мясниками, а новый юноша отправляется в горы с посохом и котомкой. джек керуак - бродяги дхармы

Сам периодически пропиваю настой. Подлечивал близких... например компрессы сняли хронические боли суставов. В моих широтах гриб выстреливает 2 раза: конец лета и в период плодоношения опёнка. Ещё одна полезность настой лисички пусть все существа будут счастливы

видать хорошо загулял)

с прошедшим!

Ну что ребятки... кто нибудь регистрировался на весну 2011

красотень!!! если шляпки раскроются может и принт удастся снять))) буду рад принять

ааааааааааааааааааааа!!!! WTF... я в ахуе. вот для продолжения банкета

пацан красавчик... к успеху идёт))) проповедь истинна. просто сложно глаголить после таких медитаций + на фоне слышно зевак сотни, собаки и дети... сбивает. мабуть видит он мир в этот момент иначе не глазами) зато по окончании улыбка полная добра и сострадания.

та просто *Я матершинник* какой-то господа, будьте придельно осторожны отныне в раза 100)))

сорри ... праздники примордии есть гуд миц со временем уплотниться. я когда делал на щепе то дождался первых признаков потемнения и в парник потом блок полностью коричневым стал. но в моём опыте примордии не одразовали тел. так и остались "гулями" висеть пока блок не высох.

На днях было обнаружено образование вполне похожее на примордию. гидратация блока холодной водой из под крана на 10 мин. и блок отправился в нормальные условия для роста ака парник))) сорри фото заделано на вэб-кам

подержи пакеты пока что так, должна образоваться защитная "корка" из более плотного мицелия. она потом начинает темнеть(коричневый-бурый). вот тогда самый раз на плодоношение. температуру тож нужно уменьшить(в зависимости от штамма). удачи.

поздравляю нас)

порадовал.

всё сделано образцово-показательно. теперь только терпение.

Доброго времени. О всех полезных свойствах гриба Рейши гугл Вам в помощь Год назад я получил презент - мицелий Рейши. Зип-лок пакетик с кусочком агара. Он был высажен в чашку Петри на новую агаровую среду. там он и хранился, в комнатных условиях. руки-крюки ни как не добирались до него и он благополучно засох эксперимента ради я соскрёб сухой миц на новую ЧП... и .gif' alt='::'> "О чудо!" он ожил и пошёл в рост. заразил им зерно. и тут стал вопрос о выборе субстрата как результат недолгих раздумий, мною был выбран коробочный картон. обработка перед инокуляцией горячая... заливаем водой 80С в закрытой кастрюле на 30-45 мин. потом промываем под краном холодной водой и повторно заливаем горячей водой 80С на 45 мин. при втором запаривании я добавлял в воду строительный мел (повышен pH). после опять промываем холодной водой (нужно чтоб весь блок остыл до 25-30С!!!) и сразу инокулируем зерновым мицелием. фоты при использовании как субстрата картона или газет можно также работать по "холодной" те. замачивать в растворе: хлорки при pH>10. но время замачивания удваивается, 4 часа примерно. Удачных экспериментов

Вешенка обыкновенная относится к тетраполярным гетероталличным базидиомицетам, половой процесс у которых требует плазмогамии двух генетически различных гомокариотических мицелиев. У P. ostreatus показана бифакториальная система спаривания, при которой совместимость детерминируется двумя несцепленными генами (А и В) с множественными аллелями, причём каждый из этих генов имеет два локуса. В базидиоспорах одного плодового тела с одинаковой частотой образуются четыре комбинации А- и В-факторов: АхВх АуВу, АхВу и АуВх [1, 3, 8]. Взаимные скрещивания сибсовых монокариотических изолятов, полученных из одного плодового тела, позволяют разделить их на четыре группы, различающиеся по типам спаривания (так называемые тестеры типов спаривания) [8]. Для подбора тест-культур были скрещены во всех возможных сочетаниях произвольно отобранные семь монокарионов P. ostreatus изолята Т-6 и 10 монокарионов изолята И-5 (табл. 2 и 3). Результаты наблюдений в зоне контакта мицелиев двух скрещиваемых монокарионов изолята P. ostreatus Т-6 Таблица 2 Монокарионы m10 m14 m17 m22 m30 m31 m42 m10 – + – + – + = m14 + – + – = – – m17 – + – + – + = m22 + – + – = – – m30 – = – = – = + m31 + – + – = – – m42 = – = – + – – Примечание. "+" – наличие пряжек, "–" – пряжки отсутствуют, "=" – валик из воздушного мицелия (здесь и в табл. 3-6). Результаты наблюдений в зоне контакта мицелиев двух скрещиваемых монокарионов изолята P. ostreatus И-5 Таблица 3 Монокарионы m10 m17 m20 m23 m24 m29 m33 m34 m41 m48 m10 – + + + – – – = – – m17 + – – – + + = – = + m20 + – – – + + = – = + m23 + – – – + + = – = + m24 – + + + – – – = – – m29 – + + + – – – = – – m33 – = = = – – – + – – m34 – – – – – – + – + = m41 – = = = – – – + – – m48 – + + + – – – = – – Нами выявлено три типа морфологии мицелиев в зоне контакта скрещиваемых монокарионов. Первый тип (1): наблюдалось полное срастание мицелиев двух скрещиваемых монокарионов, в результате чего граница между двумя колониями была еле заметна. Реверзум в зоне контакта монокарионов был лишён пигментации. Происходила дикариотизация мицелиев, так как пряжки образовывались по всей площади колоний. Второй тип (2): на линии контакта монокарионов образовывался валик ("барраж") из плотно переплетённого воздушного мицелия, наблюдалось окрашивание реверзума от светло-жёлтого до светло-коричневого цвета. Обнаружены псевдопряжки в зоне контакта колоний, что свидетельствует о затруднённой дикариотизации. Третий тип (3): на линии контакта двух колоний монокарионов формировалась сплошная чётко выраженная граница за счёт слабого роста грибов, происходил лизис соприкасающихся мицелиев, реверзум не окрашивался. Пряжек на мицелии выявлено не было. Согласно литературным данным [1, 8], первый тип морфологии мицелиев в зоне контакта колоний моноспоровых культур характерен для совместимых монокарионов (А В ), второй тип – для монокарионов, совместимые только по фактору А (А В=) и третий тип – для моноспоровых культур, совместимых только по фактору В (А=В ) или полностью несовместимых (А=В=). После перегруппировки моноспоровых культур P. ostreatus по признаку одинакового взаимодействия, обнаружено следующее их распределение по факторам половой несовместимости (табл. 4-5): Распределение моноспоровых культур P. ostreatus изолята Т-6 по факторам половой несовместимости Таблица 4 Фактор Монокарион AXBX AУBУ AXBУ AУBX m30 m42 m10 m17 m14 m22 m31 AXBX m30 – + – – = = = AУBУ m42 + – = = – – – AXBУ m10 – = – – + + + m17 – = – – + + + AУBX m14 = – + + – – – m22 = – + + – – – m31 = – + + – – – Распределение моноспоровых культур P. ostreatus изолята И-5 по факторам половой несовместимости Таблица 5 Фактор Моно- карион AWBW AZBZ AWBZ AZBW m10 m24 m29 m48 m20 m17 m23 m33 m41 m34 AWBW m10 – – – – + + + – – = m24 – – – – + + + – – = m29 – – – – + + + – – = m48 – – – – + + + – – = AZBZ m20 + + + + – – – = = – m17 + + + + – – – = = – m23 + + + + – – – = = – AWBZ m33 – – – – = = = – – + m41 – – – – = = = – – + AZBW m34 = = = = – – – + + – Обнаружение четырёх различных групп моноспоровых культур от одной базидиомы при взаимных скрещиваниях служило подтверждением тетраполярности исследуемых природных изолятов вешенки. Вешенка обыкновенная – комплексный вид с неясными границами, представленный в природе несколькими интерстерильными группами. Существуют так называемые "летние" и "осенние" штаммы P. ostreatus, различающиеся по срокам плодоношения, размерам и окраске плодовых тел. Некоторые исследователи выделяют также третью интерстерильную группу – промежуточную [9, 10]. Для определения групп интерстерильности необходимы скрещивания гаплоидных тест-культур гриба. С целью выявления общих факторов половой несовместимости у природных изолятов P. ostreatus Т-6 и И-5 проводили скрещивания четырех взаимно несовместимых для каждого изолята тестеров (4 4, всего 16 комбинаций). При анализе полученных результатов обнаружено, что зона контакта между колониями скрещиваемых моноспоровых культур была недифференцированной. Микроскопирование ( 800) показало наличие на мицелии партнёров регулярных крупных пряжек (табл. 6). Формирование фертильных дикарионов во всех 16 случаях свидетельствовало о гетероаллельности родительских изолятов по А- и В- факторам половой несовместимости. Результаты наблюдений в зоне контакта мицелиев скрещиваемых Таблица 6 монокариотических тестеров природных изолятов P. ostreatus Т-6 и И-5 Фактор Тест- культура АWВW АWВZ АZВW АZВZ И-5 m24 И-5 m33 И-5 m34 И-5 m17 АХВХ Т-6 m30 + + + + АХВУ Т-6 m42 + + + + АУВХ Т-6 m17 + + + + АУВУ Т-6 m31 + + + + Следовательно, природные изоляты И-5 и Т-6 относятся к одной интерстерильной группе, скорее всего, к группе "типично осенних" вешенок. Это подтверждается комплексом морфологических признаков, характерных для базидиом, из которых были выделены дикариотические тканевые культуры. Карпофоры у исследуемых изолятов были очень крупные (до 19 см в диаметре), окраска шляпок – темно-бурая. Споровый порошок имел слабый розовый оттенок. На следующем этапе наших исследований были скрещены совместимые монокарионы P. ostreatus, способные образовывать большое количество примордиев (более 50 в одной колбе). В результате аутбридинга получены 15 дикариотических штаммов (табл. 7). Проверка гибридных дикарионов на образование примордиев при температуре +22 С показала, что все они наследовали этот ценный признак от составляющих их монокарионов. Однако гибриды значительно различались по срокам инициации плодоношения как между собой, так и в сравнении с родительскими монокарионами и исходными природными изолятами. У 40% гибридных дикарионов индукция плодообразования началась раньше, чем у исходных природных дикарионов P. ostreatus (на 4-5-е сутки световой стадии культивирования). На индукцию плодоношения оказывали влияние как "материнский", так и "отцовский" геномы, а также эффект их взаимодействия. Например, доминирование "материнского" генома выявлено у дикариотических культур Д 4.1, Д 4.2, Д 4.3 и Д 4.4. Будучи потомками одного и того же монокариона (m42) изолята Т-6, они характеризовались одинаково ранним началом плодообразования вне зависимости от свойств "отцовских" монокарионов. Гибриды Д 1.1 и Д 3.3 наследовали способность к раннему плодоношению от "отцовских" монокарионов. У большинства гибридных дикарионов (53%) наблюдался гетерозисный эффект – ускоренная индукция плодообразования по сравнению с родительскими монокарионами. Плодоношение монокарионов и дикарионов P. ostreatus на увлажненной лузге семян подсолнечника Таблица 7 Природные дикарионы Период инициации плодоношения, сут. Т-6 7 ± 0,4 И-5 8 ± 0,7 Гибридные дикарионы "материнский" монокарион "отцовский" монокарион гибрид AXBX AWBW AXBX × AWBW Д 2.2 (m30 × m29) 8 ± 0,6 12 ± 0,5 5 ± 0,3* Д 2.5 (m30 × m48) 8 ± 0,2 11 ± 0,7 4 ± 0,9* AXBX AWBZ AXBX × AWBZ Д 2.4 (m30 × m41) 8 ± 0,9 12 ± 0,3 5 ± 0,6* AXBX AZBW AXBX × AZBW Д 2.3 (m30 × m34) 8 ± 0,5 22 ± 0,9 5 ± 0,6* AXBX AZBZ AXBX × AZBZ Д 2.1 (m30 × m20) 8 ± 0,2 10 ± 0,7 5 ± 0,1* AXBУ AWBW AXBУ × AWBW Д 4.2 (m42 × m29) 7 ± 0,4 12 ± 0,8 8 ± 0,7 Д 4.4 (m42 × m48) 7 ± 0,6 11 ± 0,3 8 ± 0,5 AXBУ AWBZ AXBУ × AWBZ Д 4.3 (m42 × m41) 7 ± 0,1 12 ± 0,8 7 ± 0,4 AXBУ AZBZ AXBУ × AZBZ Д 4.1 (m42 × m20) 7 ± 0,8 10 ± 0,3 7 ± 0,5 АУВХ AWBW AУBХ × AWBW Д 1.1 (m17 × m29) 20 ± 0,4 12 ± 0,7 13 ± 0,2 Д 1.2 (m17 × m48) 20 ± 0,6 11 ± 0,1 7 ± 0,9 АУВХ AWBZ AУBХ × AWBZ Д 1.3 (m17 × m41) 20 ± 0,5 12 ± 0,2 8 ± 0,8 АУВУ AWBZ AУBУ × AWBZ Д 3.3 (m31 × m41) 19 ± 0,6 12 ± 0,5 12 ± 0,4 АУВУ AZBW AУBУ × AZBW Д 3.2 (m31 × m34) 19 ± 0,3 22 ± 0,8 13 ± 0,6 АУВУ AZBZ AУBУ × AZBZ Д 3.1 (m31 × m20) 19 ± 0,4 10 ± 0,7 5 ± 0,3* Примечания: 1. * – культуры, начавшие плодоносить раньше природных изолятов; 2. AXBX, AXBУ, АУВХ, АУВУ – факторы половой несовместимости моноспоровых культур изолята Т-6; 3. AWBW, AWBZ, AZBW, AZBZ – факторы половой несовместимости моноспоровых культур изолята И-5. Количество зачатков плодовых тел у полученных дикарионов варьировало от 2 (Д 1.2) до более 20 штук (Д 2.5, Д 3.1, Д 4.2) на одну колбу. Большинство исследуемых гибридов образовывали по 8-12 примордиев на колбу. Как правило, из-за ограниченного количества субстрата, дальнейшее развитие получали 2-3 примордия в каждом сростке, подавляя рост и дифференциацию соседних зачатков, что соответствует литературным данным [1, 2]. Из примордиев, образовавшихся на мицелии гибридных дикарионов в течение 4-6 суток развивались нормальные плодовые тела, дифференцированные на эксцентрическую ножку и шляпку с выраженным гименофором. Окраска шляпок была тёмно-бурой, как и у родительских природных дикарионов P. ostreatus. Таким образом, полученные данные по наибольшему влиянию эффекта взаимодействия родительских моноспоровых культур на фенотипическую изменчивость индукции плодообразования гибридных дикарионов могут быть использованы для создания генетических программ улучшения штаммов P. ostreatus. Выводы 1. Способность к образованию примордиев на увлажненной лузге семян подсолнечника при температуре +22°С выявлена у 43 и 47% монокарионов, полученных от природных изолятов P. ostreatus Т-6 и И-5 соответственно. Зачатки плодовых тел, образовавшиеся на мицелии моноспоровых культур, развивались в уродливые коралловидные образования и не дифференцировались на шляпку и ножку. Для получения высокопродуктивных дикарионов отобраны моноспоровые культуры, которые формировали более 50 примордиев в одной колбе. Половой статус отобранных монокарионов соответствовал тетраполярной системе несовместимости. 2. Установлено, что природные дикарионы P. ostreatus Т-6 и И-5 гетероаллельны по А- и В-факторам половой несовместимости и относятся к одной интерстерильной группе. 3. Все гибридные дикарионы P. ostreatus, полученные в результате межштаммового скрещивания, наследовали способность к плодоношению при температуре +22°С от составляющих их монокарионов. На индукцию плодообразования оказывали влияние как "материнский", так и "отцовский" геномы, а также эффект их взаимодействия. Список литературы 1. Бисько Н. А., Дудка И. А. Биология и культивирование съедобных грибов рода вешенка. – К.: Наук. думка, 1987. – 148 с. 2. Бухало А. С. Сучасні тенденції культивування грибів із роду Pleurotus // Укр. ботан. журн. – 1990. – Т. 47, № 2. – С. 101-104. 3. Дьяков Ю. Т., Камзолкина О. В., Грубее Е. Т. Проблемы генетики и селекции съедобных грибов (обзор) // Прикладная биохимия и микробиология. – 1996. – Т. 32, № 4. – С. 382-385. 4. Горленко М. В. Грибы как источник пищевых белков // Микология и фитопатология. – 1983. – Т. 17, № 3. – С. 177-180. 5. Меліхова Г. І., Тюфкій А. В., Демченко С. І. Дослідження деяких біологічних властивостей природних ізолятів Pleurotus ostreatus (Jacq.: Fr.) Kumm. // Зб. тез III Міжнар. наук. конф. студентів і аспірантів "Молодь та поступ біології" (м. Львів, 23-27 квітня 2007 р.). – Львів, 2007. – С. 430-431. 6. Методы экспериментальной микологии: Справочник / Дудка И. А., Вассер С. П., Элланская И. А. и др. – К.: Наук. думка, 1982. – 550 с. 7. Приседський Ю. Г. Статистична обробка результатiв бiологiчних експериментiв: Навч. посiбник. – Донецьк: ТОВ "Норд Компьютер", 1999. – 210 с. 8. Сухомлин М. М. Статеве розмноження вищих базидіоміцетів. – Донецьк: ДонНУ, 2001. – 173 с. 9. Шнырёва А. В., Белоконь Ю. С., Белоконь М. М. Вариабельность изоферментных спектров природных штаммов Pleurotus ostreatus, собранных на территории Московской области // Микология и фитопатология. – 2004. – Т. 38, № 2. – С. 59-66. 10. Шнырёва А. В., Дружинина И. С., Дьяков Ю. Т. Генетическая структура комплекса Pleurotus ostreatus sensu lato на территории Московской области // Генетика. – 1998. – Т. 34, № 12. – С. 1610-1618. Демченко С. І., Мєліхова Г. І. Плодоношення моноспорових культур і гібридних дикаріонів Pleurotus ostreatus (Jacq.: Fr.) Kumm. у лабораторних умовах. – Відібрано моноспорові культури P. ostreatus, що є перспективними для подальших етапів моноспорової селекції. Виявлено загальні фактори статевої несумісності для природних ізолятів І-5 та Т-6. Монокаріони цих ізолятів використано для одержання гібридних дикаріонів за допомогою аутбридингу. Встановлено, що на індукцію плодоутворення гібридів впливають геноми батьківських моноспорових культур і ефект їх взаємодії. Ключові слова: монокаріон, гібридний дикаріон, фактори несумісності, аутбридинг, плодоношення, примордій. Demchenko S. I., Melihova G. I. Fruiting of Pleurotus ostreatus (Jacq.: Fr.) Kumm. monokaryotic isolates and dikaryotic hybrids in laboratory condition. – The homokaryotic isolates of perspective for the further stage monokaryotic selection are selected. The general sexual incompatibility factors are revealed for P. ostreatus field isolates I-5 and T-6. The homokariotic cultures these isolates are used for reception of dikaryotic hybrids by means of autbreeding. The influence of homokaryotic parental genomes and effect of their interaction on fruit-forming induction of hybrid strains is established. Key words: monokaryon, dikaryotic hybrid, incompatibility factors, autbreeding, fruiting, primordium.

С. И. Демченко, Г. И. Мелихова ПЛОДОНОШЕНИЕ МОНОСПОРОВЫХ КУЛЬТУР И ГИБРИДНЫХ ДИКАРИОНОВ PLEUROTUS OSTREATUS (JACQ.: FR.) KUMM. В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ Донецкий национальный университет; 83050, г. Донецк, ул. Щорса, 46 e-mail: sdemch5@mail.ru Демченко С. И., Мелихова Г. И. Плодоношение моноспоровых культур и гибридных дикарионов Pleurotus ostreatus (Jacq.: Fr.) Kumm. в лабораторных условиях. – Отобраны моноспоровые культуры P. ostreatus, перспективные для дальнейших этапов моноспоровой селекции. Выявлены общие факторы половой несовместимости для природных изолятов И-5 и Т-6. Монокарионы этих изолятов использованы для получения гибридных дикарионов с помощью аутбридинга. Установлено, что на индукцию плодообразования гибридов влияют геномы родительских моноспоровых культур и эффект их взаимодействия. Ключевые слова: монокарион, гибридный дикарион, факторы несовместимости, аутбридинг, плодоношение, примордий. Введение Искусственное выращивание съедобных грибов имеет большое значение в решении таких острых проблем современности, как устранение дефицита пищевого белка в рационе питания человека и охрана окружающей среды путём создания безотходных технологий. Для современного грибоводства характерно расширение объёмов и усовершенствование технологии культивирования вешенки обыкновенной (Pleurotus ostreatus (Jacq.: Fr.) Kumm.) – съедобного дереворазрушающего базидиомицета, до недавнего времени мало известного в Европе. В настоящее время этот гриб является серьёзным конкурентом шампиньона двуспорового (Agaricus bisporus (J. Lange) Imbach.) – традиционного объекта промышленного грибоводства [2, 4]. Преимуществами видов рода Pleurotus перед другими культивируемыми грибами являются значительная конкурентоспособность по отношению к посторонней микрофлоре, способность усваивать из различных растительных отходов сельского хозяйства, лесоперерабатывающей и бумажной промышленности такие труднодоступные углеродные соединения, как целлюлоза и лигнин; простота технологии выращивания, исключающей длительный процесс подготовки субстрата и необходимость использования покровной почвы; возможность применения отработанного субстрата в качестве удобрений или корма для сельскохозяйственных животных и т.п. [1]. Дальнейшее развитие производства вешенки в Украине требует создания высокопродуктивных отечественных гибридных штаммов этого гриба, пригодных для промышленного культивирования. Несмотря на значительную природную вариабельность генофонда видов рода Pleurotus, для создания штаммов, обладающих хозяйственно ценными признаками, необходима целенаправленная селекционная работа [1, 2]. Мутагенез – основной метод улучшения штаммов промышленных микроорганизмов – в селекции съедобных грибов находит ограниченное применение, в связи с маскировкой рецессивных мутаций доминантными аллелями дикого типа в гетерокарионе, а также отрицательным влиянием на продуктивность. Наиболее распространённым методом получения новых штаммов высших базидиомицетов остаётся гибридизация [3]. На кафедре физиологии растений Донецкого национального университета активно проводится работа, направленная на получение высокоурожайных штаммов P. оstreatus на основе многоступенчатой системы моноспоровой селеции, которая включает следующие этапы: отбор природных изолятов с ценными для производства признаками; получение моноспоровых культур; отбор монокарионов, способных образовывать примордии; подбор тест-культур, соответствующие каждому варианту сочетания факторов половой несовместимости; определение факторов несовместимости у отобранных моноспоровых культур; скрещивание совместимых монокарионов; отбор фертильных дикарионов в лабораторных и полупроизводственных условиях; производственное испытание гибридных штаммов [1]. Целью нашей работы было получить моноспоровые культуры и гибридные дикарионы P. ostreatus и изучить их способность к плодоношению в лабораторных условиях. Объекты и методы исследования В исследованиях использовали моноспоровые культуры двух природных изолятов P. ostreatus И-5 и Т-6, отобранные на первом этапе моноспоровой селекции [5], и гибридные дикарионы, полученные в результате межштаммового скрещивания. Выделение моноспоровых культур проводили на картофельно-глюкозном агаре (КГА) в чашках Петри при температуре +26±1°С, используя метод последовательных десятикратных разбавлений [6]. Гомокариотичность полученных культур проверяли методом микроскопирования по отсутствию пряжек на мицелии, характерных для дикарионов [1]. Моноспоровые изоляты маркировали индексом "m" – monokaryon. Гибридные дикарионы получали с помощью аутбридинга: попарно скрещивали на КГА совместимые монокарионы двух различных изолятов P. ostreatus. Срастание колоний происходило через 8-10 суток инкубации при температуре +26±1°С. Образование фертильных дикарионов устанавливали путём микроскопирования ( 800) по наличию пряжек в районе клеточных септ, что подтверждает миграцию ядер между сращиваемыми гомокариотическими мицелиями с последующим формированием генетического диплоида. Выделение моноспоровых тестеров, гетероаллельных по А- и В-факторам половой несовместимости (по четыре для каждого изолята P. ostreatus), проводили следующим образом: 10 произвольно взятых моноспоровых культур, полученных от природного дикариона, скрещивали во всех возможных комбинациях на КГА в чашках Петри (по две гаплоидные культуры помещали на расстоянии 1,5-2 см друг от друга). Через 6-8 суток после начала инкубации при температуре +26±1°С линию соприкосновения колоний диаметром 5-6 см микроскопировали ( 800) для обнаружения пряжек. Результаты наблюдений (присутствие или отсутствие пряжек, наличие валика между колониями) записывали в таблицу. После этого осуществляли перегруппировку культур по признаку одинакового взаимодействия. Для выявления общих факторов половой несовместимости у природных дикарионов P. ostreatus И-5 и Т-6 проводили скрещивания четырех взаимно несовместимых для каждого изолята монокариотических тестеров ("мон-мон"-скрещивания; всего 16 комбинаций). Скрещивания осуществляли на КГА в чашках Петри. Формирование дикарионов во всех 16 случаях свидетельствует о гетероаллельности природных изолятов по А- и В-факторам. 25% (4 случая из 16 возможных) совместимых комбинаций, сопровождающихся формированием дикарионов, свидетельствует о наличии общих аллелей А- и В-факторов половой несовместимости. Полная несовместимость между всеми монокариотичными тестерами двух изолятов (отсутствие формирования дикарионов при их скрещивании) свидетельствует о взаимной стерильности, то есть о принадлежности этих природных изолятов к разным биологическим видам (группам интерстерильности) [10]. Тест на образование примордиев моно- и дикарионами P. ostreatus, предложенный Г. Эгер [1], нами был модифицирован. Для этих целей в качестве субстрата использовали не агаризованную среду, приготовленную по методике Г. Эгер, с последующим добавлением 0,05 М Na-фосфатного буфера (рН 6,5) и 2%-го аспарагина, а увлажненную лузгу семян подсолнечника, которая широко применяется в промышленном грибоводстве. Увлажненный субстрат (9 г воздушно-сухой лузги и 36 мл водопроводной воды) помещали в колбы Эрленмейера емкостью 250 мл и стерилизовали в автоклаве в течение одного часа при 1,2-1,4 атм. Остывший субстрат засевали инокулюмом, которым являлся блок глюкозо- картофельной агаровой среды (диаметром 0,7 см) с мицелием, вырезанным из зоны роста семисуточной культуры моно- или дикариона, адаптированных к темноте. Моноспоровые культуры и гибридные дикарионы вначале культивировали в полной темноте при температуре +26±1°С до полного обрастания субстрата мицелием (темновая фаза), после чего колбы выставляли на стеллажи под лампы дневного света (интенсивность освещения составляла 1500 лк, температура – +22°С) (световая фаза). В ходе световой фазы в течение одного месяца фиксировали период инициации плодоношения и подсчитывали количество примордиев в одной колбе для каждой культуры. Повторность всех проведенных опытов была трехкратной. Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью методов однофакторного и двухфакторного дисперсионного анализа для равномерных комплексов, а также множественного сравнения средних по критериям Дункана, Даннета и Тьюки [7]. Результаты и обсуждение Способность изолятов P. ostreatus образовывать примордии на монокариотической стадии развития является важным в селекционном отношении признаком, так как доказано, что для получения дикариона, обладающего повышенной способностью к плодоношению, необходимо провести скрещивание монокарионов, для которых также характерна высокая степень дифференциации мицелиальной ткани [1]. От двух природных изоляттов P. ostreatus Т-6 и И-5, обладающих ценными признаками для промышленного грибоводства [5], получены по 60 моноспоровых культур, у которых изучена способность образовывать примордии на увлажненной лузге семян подсолнечника при температуре +22°С, близкой к оптимальной температуре для роста вегетативного мицелия. Плодоношение моноспоровых культур P. ostreatus на увлажненной лузге семян подсолнечника Таблица 1 Показатели Материнские природные изоляты Т-6 И-5 Общее количество монокарионов 60 60 Количество монокарионов, не образующих примордии 34 32 Количество монокарионов, образующих примордии 26 28 Количество монокарионов, образующих более 50 примордиев в одной колбе 4 5 Анализ данных, приведенных в табл. 1, показал, что способность к плодоношению обнаружена как у монокарионов, полученных от природного изолята Т-6 (43%), так и от изолята И-5 (47%). Однако во всех случаях зачатки плодовых тел, образовавшиеся на мицелии моноспоровых культур, не дифференцировались на шляпку и ножку: в одних случаях они оставались слабо выраженными, в других – за 4-5 суток развивались в уродливые коралловидные образования (рис. 1). Время образования первых примордиев у монокарионов обоих изолятов варьировало от 7 до 27 суток с момента выставления колб на свет. При этом наименьший период инициации плодоношения (7-18 суток) обнаружен у 20% монокарионов изолята Т-6 и лишь у 13% монокарионов изолята И-5. Исследуемые моноспоровые культуры формировали различное количество зачатков плодовых тел (от 2 до более 50 штук на одну колбу). Среднее их количество для большинства монокарионов изолята Т-6 составило 10-16, для монокарионов изолята И-5 – 7-14 штук на колбу. Для получения высокопродуктивных дикарионов нами были отобраны те моноспоровые культуры, которые формировали более 50 примордиев в одной колбе при температуре +22°С. Аутбридинг предусматривает скрещивание совместимых моноспоровых культур, изолированных от двух разных природных дикарионов P. ostreatus. Поэтому перед нами стояла задача подобрать гаплоидные тест-культуры по факторам половой несовместимости для изолятов Т-6 и И-5 и выявить их принадлежность к одной интерстерильной группе.

с меня топик об изоляции и выведении субстрэйнов(под-штаммов); ведение культуры на агаре. когда? как только так сразу!

монки мои поздравления ... сообщение 777!!!

допускается до 5 пересадок (трансферов) мицелия на агаре включая этап изоляции штамма... а потом всёравно нужно получить плоды и клонировать. также для "укрепления" используются разные агаровые среды (картофель, пшеница, овёс, солома и тд) генетика заключается в получении "под"-штамма подходящего под те или иные условия. скрещивание в грибоводстве очень сложно... разделить отдельно взятые споры по 1 шт разных генетических линий, герметизировать (+) и (-)... имхо сложновато будет